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不同的同工酶与蛋白质如何选用聚丙烯酰胺凝胶
不同的同工酶与蛋白质所选用的凝胶(聚丙烯酰胺)浓度和缓冲液,量出制凝胶板的模具所需胶液的总体积,以1/8总体积为1份,按下列比例分别配置两种胶液;浓胶液(15%或30%)2份C液+1份T液+1份P液,先将4%有胶液倒入ATP ,松开鳄鱼夹使稀胶液度满乳胶管(赶出气泡),再将鳄鱼夹夹紧,当浓胶液倒入B管进将穿刺针往上翘以免溶液漏出,排除穿刺针与侧管接头处的气泡,再将磁力搅拌器和鳄鱼夹打开穿刺的末端对准制胶玻板的中央,混合后的胶液将沿着玻板徐徐流下,待A、B管中的胶液流尽(约需2min)正好距短玻板的顶端约2cm。在胶液面上小心地加入蒸馏水约0.5cm,控制温使凝胶液在20min之内聚合。聚合时间太慢对梯度胶的形成不利,聚合后将上层的水吸干,加入样品槽胶液(按2.5份D液+1份T液+1份P液配成),再将样品槽模板放入,待聚合后将此模板拔出即可加样。
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